简介
本实验来源「细胞实验指南」 黄培堂 等译。来源：丁香实验
操作方法
从悬浮细胞中制备细胞膜
一、用胶原酶/EDTA 释放细胞
1. 用预保温溶液洗涤单层细胞并用胶原酶处理
(1) 预保温溶液洗涤细胞。
预保温溶液：
5 mmol/L EDTA 钠盐溶于 HBSS，不含二价阳离子。
(2) 在单层细胞上加 1% 的胶原酶溶液，在 37℃ 保温 30 分钟，偶尔摇动。
1% 胶原酶：
IV 型胶原酶（Sigma ) 溶解在含 1 mmol/L CaCl2 的 1% 的 BS
从组织培养皿中的汇合或部分汇合细胞中分离顶层膜、基底膜或中间膜1. 制备下列溶液：
(1) 包被缓冲液（CB）
20 mmol/L MES
135 mmol/L NaCI
0.5 mmol/L CaCl2
1 mmol/L MgCl2
pH 5.5
(2) 1% 溶于 CB 缓冲液的阳离子硅胶
(3) 溶于 CB 的 1 mg/ml PAA
用 NaOH 和 pH 试纸调节 pH 值到 5.5。
(4) 含有蛋白酶抑制剂的裂解缓冲液
(
从生长于微载体上的细胞中分离细胞膜1. 准备下列仪器：
微型离心机
临床台式离心机
超离心机
吊桶式转头和合适的离心管
振荡器
尼龙单丝网，孔径约 50 μm
探头超声仪
2. 将微载体培养物转移到 50 ml 的锥形离心管中。
3. 用无血清培养基或含有 Ca2+ 和 Mg2+ 的 PBS 溶液洗涤微载体上的细胞两次。
4. 用冰冷 CB 洗涤细胞一次。
5. 微载体在 1 g 重力下下沉的过程中，锥形离心